MDA(丙二醛)检测

MDA(丙二醛)检测

MDA detection

实验原理

丙二醛(MDA)是常用的膜脂过氧化指标,在酸性和高温度条件下,可以与硫代巴比妥算(TBA)反应生成红棕色的三甲川(3,5,5-三甲基恶唑-2,4-二酮),其最大吸收波长在532nm。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰,其中最主要的是可溶性糖,糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm,但532nm处也有吸收。植物遭受干旱、高温、低温等逆境胁迫时可溶性糖增加,因此测定植物组织中MDA-TBA反应物质含量时 一定要排除可溶性糖的干扰。低浓度的铁离子能够显著增加TBA与蔗糖或MDA显色反应在532、450nm处消光度值,所以在蔗糖、MDA与TBA显色反应中需一定量的铁离子,通常植物组织中铁离子的含量为每克干重100~300u g.g^-1,根据植物样品量和提取液的体积,加入Fe^3+的终浓度为0.5u mol.L^-1。

MDA(丙二醛)检测

试剂

1:质量分数为10%三氯乙酸(TCA);

2:质量分数0.6%硫代巴比妥酸:先加少量的氢氧化钠(1mol·L-1)溶解,再用10%的三氯乙酸定容;

方法

1:MDA的提取 称取剪碎的试材1g,加入2mll0%TCA和少量石英砂,研磨至匀浆,再加8mlTCA研磨,匀浆在4000r/min离心10min,上清液为样品提取液。

2:显色反应和测定 吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水),加入2ml0.6%TBA溶液,混匀物于沸水浴上反应15min,迅速冷却后再离心。取上清液测定532、600和450nm波长下的消光度。

实验结果展示

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