分子生物学

HDA检测 HDA detection 实验原理 本研究以建立解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法为目的,选择三种超级细菌NDM-1基因(metallo-beta-lactamase 1 gene)为目的基因,设计并合成特异性引物,建立和优化了可快速检测该种基因的HDA检测方法。特异性和灵敏度检测结果表明:该方法对NDM-1基因检测具有特异性,最低检测限可达10fg/μL,灵敏度高于普通PCR。…

miRNA的表达载体构建 vector construction 实验原理 miRNA是在真核生物中发现的具有调控功能的内源性非编码RNA，大小约20~25个核苷酸。我们根据成熟miRNA序列信息，合成含有茎环结构的前体miRNA连接至含侧翼序列的表达载体中(见图6.1），将其转染/病毒包装感染进入细胞后，由II型启动子（CMV）启动表达，经核酸酶的剪切加工，组装RNA诱导的沉默复合体，通过碱基互…

shRNA载体构建及筛选 ShRNA carrier 实验原理 早期的shRNA载体多采用RNA聚合酶III型启动子介导shRNA的表达，RNA聚合酶III型启动子如鼠源的U6启动子和人源的H1启动子可以在哺乳动物细胞中表达小分子RNA。随着miRNA干扰机制的深入研究，发展出第二代siRNA载体，即采用RNA聚合酶II型启动子CMV表达含侧翼序列的miRNA模拟物（见图2.2）。该载体模拟miR…

高效液相色谱法（HPLC） chromatography 实验原理 以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。其基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色信号或进行数据处理而得到分析结果。 高效液相色谱仪(HPLC)用液体为流动相的色…

化学合成 Chemical translation 实验原理 基因的化学合成即人工合成寡核甘酸片段，通过PCR拼接的方法，获得所需要的基因表达序列或者启动子等功能性元件片段。基因化学合成使合成任何基因序列成为可能。 技术应用 序列密码子优化，高效表达目的基因 基因、蛋白的功能研究 实验流程 实物 数据信息 实验周期 客户提供 无 目的基因NCBI登陆号 4周 我们提供 质粒/菌株 基本实…

基因芯片 gene chip 实验原理 基因芯片 (gene chip)是目前生物芯片家族中最完善、应用最广泛的芯片，将许多特定的寡聚核苷酸或DNA片段(称为探针)固定在芯片的每个预先设置的区域内，将待测样本标记后同芯片进行杂交，利用碱基互补配对原理进行杂交，通过检测杂交信号并进行计算机分析，从而检测对应片段是否存在、存在量的多少，以用于基因的功能研究和基因组研究、疾病的临床诊断和检测等…

甲基化检测 Methylation detection 实验原理 DNA甲基化存在于大多数真核生物中，一般发生在CpG双核苷酸中胞嘧啶的5’UTR区，起调控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化，20%处于基因调控区的CpG岛中。BSP甲基化测序（Bisulfite Genomic Sequencing PCR）的原理通过对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理，非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成尿嘧啶，…

目的基因ORF克隆 ORF cloning 实验原理 ORF 克隆是指从样本组织或细胞中抽提总 RNA，反转录，设计合成特异性引物后，通过 RT-PCR 扩增获得目的基因的 DNA 序列，获得编码全长蛋白质序列的 DNA 序列：即从起始密码 ATG 到终止密码子，不含 5′或 3′UTRs 非翻译区）及内含子序列。 技术应用 目的基因的表达研究 基因、蛋白的功能研究 实验流程 …

SNP 检测 SNP detection 实验原理 单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNP）是指基因组上单个核苷酸的变异，人类基因组平均每1000个就有一个SNP。它是由基因组DNA某一特定核苷酸位置上单个碱基的转换、颠换、插入或缺失引起的点突变，使得群体之间和个体之间产生了差异。其中转换和颠换发生频率较高，转换是指同型碱基之间的转换，即嘌呤与嘌呤、…

染色免疫沉淀 chip-seq 实验原理 CHIP-seq，指的是结合位点分析法，作用为研究体内蛋白质与DNA相互作用。染色质免疫共沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）也称结合位点分析法，是研究体内蛋白质与DNA相互作用的有力工具，通常用于转录因子结合位点或组蛋白特异性修饰位点的研究。 将ChIP与第二代测序技术相结合的ChIP-Seq技术，能够高效地在…